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荧光显微镜的原理-生物量测与分析应用




来源:yiyi
时间:2013-4-18 22:54:00

荧光显微镜的原理-生物量测与分析应用


荧光蛋白与冷光蛋白虽然皆可发光,但是其发光原理并不尽相同。荧光是指分子可以藉由特定波长的光所激发,
使其电子跃迁至激发态,当电子松弛回到基态时,其能量差是以光的型态发射出来,而所发出的光被称为荧光。

同样是以发射光的形式来达到松弛的现象还有磷光(phosphorescence)。相对于磷光有较缓慢的持续发光,荧光的发射是属于即时性的,
由于被激发的电子停留在高能阶的时间极短(<10-5秒),一旦激发光不存在,所发射的荧光也会随之消失,因此具有即时侦测的特性。

冷光在原理上和荧光极为相近,都是藉由激发电子至激发态再松弛回基态时的能量差来产生光,
所不同的是,荧光是藉由光子所激发,而冷光是藉由化学反应来产生使电子到达激发态所需的能量。
虽然发光原理相近,但是由于其激发源头不同,荧光与冷光的性质也有差异。在荧光测试中,

使用者可以在短时间内利用光源快速激发检体,因此可以产生强度较高的光,但是其背景值也比较大。
相对于荧光,冷光产生所需的激发能源是经由较为缓慢的化学反应,故所发出的光比较微弱,
但优点是几乎没有背景值的存在。基于此,此两种发光蛋白在生物检测上也有所差异,
以下我们将针对荧光及冷光分别做介绍,并就其在生物量测与分析提出应用的实例。

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