了解细菌的染色原理与用途-正置生物显微镜观察细胞壁结构
革兰氏染色法(Gram staining)
一、目的：了解细菌的特殊染色原理与用途。
二、原理：依据细菌的细胞壁化学组成不同，可分为革兰氏阳性菌G(+)：细胞壁有多层胜肽
聚糖。革兰氏阴性菌G(-)：细胞壁的外层由脂多糖及单薄的胜肽聚糖所组成。酒精脱色
过程中可将CV-I 复合物溶出，所以脱色为革兰氏鉴别染色中的重要步骤。
三、材料：
1.显微镜 2.拭镜纸 3.洋杉油 4.酒精灯 5.试管架 6.接种环 7.染色盘 8.镊子
9.玻片夹 10.载玻片11.蒸馏水 12.卫生纸13.二甲苯 14.95%酒精
15.液态培养菌液：
○1Escherichia coli (E.coli)大肠杆菌 ○2Lactobacillus plantarum 胚芽乳杆菌
16.染色试剂：
○1结晶紫Crystal violet stain ○2碘媒染剂 Gram iodine mordant
○395%酒精 Ethyl alcohol，95% ○4番红溶液 Safranin solution
四、方法：
(1)制作抹片：取slide 洗净，烘干备用→无菌loop 菌液涂抹均匀→酒精灯余热烘干
(2)染色
○1初染剂：结晶紫1min→背面水洗 ○2媒染剂：碘液1min→背面水洗
○3脱色剂：30sec(95%酒精)→背面水洗 ○4番红复染：30sec→背面水洗
(结合成CV﹣I 化合物，增加结晶时与CW 结合力)
