倒置生物显微镜适合用来观察细胞培养实验
对于在上海光学仪器一厂倒置显微镜下的观察来说,细胞培养容器
塑料制品优于玻璃的。
玻璃的主要优点是价格便宜,所以在常规维持培养时应当
认真考虑。不论塑料和价廉而硬度低的玻璃都不能重复使用。
1.当倒掉瓶内液体的时候,应将培养瓶口在火焰上稍微
烤一下。在常规的操作中,作者只在倒掉液休后将瓶口火烤。
严格的技术要求在倒掉液体的前后都要进行火烤。
2.自培养物倒出的液体,应当经漏斗倾注入一个锥形瓶
中,随后应将漏斗用1:10稀释的漂白粉(Clorox)彻底清洗,
减少细胞间交叉污染的危险。
3.已经插入装有细胞的瓶中的吸管,再不能插进贮存培
养基、盐溶液或胰酶的瓶中。
4.决不将一个入的细胞都在同一天传代培养。剩下的细
抱至少保存48小时(如果可能的话),然后再处理(传代培养
或更换培养基)。小心地首先检查传代培养的细胞有无污染
的迹象(培养基混浊不清,异常的pH)
5.血清吸管在使用后,尽快地将每个吸管的棉花塞吹出,
然后倒过来放人浸液(1并7X)中。用过的吸管不应该任其
干涸。
6.使用你自己盛原液用的瓶子和盛吸管的吸管雄,决不
使用别人的。因为一旦污染发生,别人的或你自己的错误
操作,都可能对确定污染源造成困难。
7.当将装有培养基的瓶子再放回冰箱中供以后使用时,
始终要保证将瓶帽塞紧,特别是对于C02缓冲荆。如果pH
变得太碱(鲜粉红色—酚红指示剂),培养基须补充C02气
体1分钟、或直到培养基的颜色达到正常(橙红色)。不要将
C02气流直接通人含有胎牛血清的培养基中,否则将产生过
多的泡沫。
8.为了节约,将旧培养瓶留着当作一个新培养瓶使用是
不明智的。这一方法的主要问题是:(1)有组织碎片或旧培
养基的堆积;(2)在传代培养的过程中,细胞的分配不准确。
9.就常规的细胞维持来说,至少应该建立2个新的培养
物,然后,在下一次传代培养时,一个可以进行传代而另一个
保留下来,以防发生污染或生长出现问题。.培养物在一分为
四以后,不一定4个都建立(2个就足够)。通常,保存数个传
代培养的老培养物时,在每个传代瓶子背面都注上日期是明
智的。保存3个以上不同时期的传代培养瓶子,通常是不必
要的,而且不能合理利用培养箱的空间。
10.人的二倍体单层细抱,每周应该传代培养或更换培养
基一次以上。它们容许一分为二或一分为四,习惯上不推荐
一分为八。
11.当细胞是用作染色体研究的时候,推荐用75平方厘
米的瓶子,因为它们比它英两容量的瓶子有较大的表面,在细
胞生长到汇合时,75平方厘米的培养瓶一般每瓶含有6-
7 X 106次方的细胞,而8英两的瓶子约含2-3 X 106次细胞。
不可在玻璃和塑料容器之间来回来去接种细胞。
12.在条例中未包括16英两容量的瓶子。它们在容量上
和细胞增殖到汇合时的预期细胞数约相当于75厘米的锥形
瓶。因为它们不能架着放置,所以须占用较大的温箱的空间