显微镜数码图像的分辨率首先取决于光学图像的分辨率
从显微镜获得的数码图像的分辨率首先取决于光学图像的分辨率。
分辨极限的定义是:样品上两个独立的对象在光学图像中也可清楚分开
所必需的较小距离。在显微成像中,
数码显微图像的分辨率进一步取决于并限制于构成CCD 芯片的单个
光电二极管的物理大小
相机像素大小决定了你需要利用放大多少倍的显微镜以获得较高分
辨率的数码图像。让我们利用一个实例来了解怎样根据你所用的相机来
计算所需要的光学放大倍数。假如我们所用的物镜的NA是1.4 ,那么在
535nm 波长的发射光下获取绿荧光图像的光学图像中的分辨率极限为0.2
μm
我们假设使用的相机在技术数据表中显示的像素大小是6.45μm 那
么我们需要将样品上较小的可辨别的距离(0. 25m)在CCD 芯片上放大
到至少19.4μm ,占用3 个光电二极管(6.45X3=19.4 ),得到的结果
是96倍。为了得到这一放大倍数,我们可以单独使用一个l00x 1.4NA
的物镜或者使用60 X1.4NA 的物镜与1.5X的附加放大设备组合。显微镜
制造商一般都会在研究级别的显微镜上生产带有可选范围在1.2X-2.OX
的附加放大设备(称为光转换器或放大转换器)。但是,附加的放大倍
数也可以在相机上添加一个能够放大的镜头来实现。