荧光显微镜结构特征之照明装置有哪些类型
荧光显微镜检术采用的照明系统的主要类型是:透射式暗场、亮
场照明和入射式暗场照明,后者用环形聚光器,或者通过一个普通的、
适于亮场照明的显微镜物镜作入射照明。
日常的荧光显微镜检术中,一般用分级暗场照明或通过普通物镜
作表面照明。
然而,在测微荧光术中,常常要把上述照明类型结合起来。
暗场聚光器
在用暗场聚光器的情况下,聚焦在样品上的激发光锥不直接进入
显微镜物镜,而构成中空的光锥,光锥的顶点落在样品平面内。只有
当存在显微镜样品时,光线才被折射进入物镜,于是形成暗场像。暗
场聚光器特别适用于荧光显微镜检术,因为荧光显微镜的数值孔径
(NA)较高。为了得到恒定荧光读数所需要的、可多次重复的照明条
件,必须预先极小心地让聚光器聚焦和精确对中
亮场聚光器
亮场聚光器很少用于日常的荧光显微镜检术,因为暗场聚光器产
生的像反差高得多。然而,在测微荧光术中,根据样品吸收透射光的
程度及其荧光象,可以用它来寻找并挑选显微镜制品中合适的区域。
测微荧光术中,测量前要把物体引进测量视野内。因为寻找物体
并把它小心地对在测量光阑中心内常常很费时间,所以这一步不宜用
强度高的表面光完成,否则FRP 会发生不希望的、迅速的衰减。由于
若干种FRP 也有吸收像,在用低压灯为光源,用透射式亮场照明时能
够观察到。
在这些情况下,实际上不存在FRP 的衰减。某些双染技术中,同
一个显微镜样品上只有一种FRP 能用荧光显微镜检术发觉
在这种情况下,同样的分级亮场聚光器也必须用于荧光显微镜检
术。如果具有现代高质量的短波通干涉型干涉滤波器,用分级亮场聚
光器常常可以得到反差满意的像