高图像质量光学显微镜常识-光源到物镜二维图像
当透射光线到达检测器时,彩色的电子束分裂器将激发光线反射
至样本。光源到物镜的光路和物镜到检测孔的光路本质上是一样的。
因此。照明和检测孔都聚焦在样本上的照明点,这就是为什么把
该系统叫做“共焦”。由于被检测的信号通常十分微弱,使用的检测
器是一个光电倍增管。
共聚焦系统中,一次只能观察一个点。因此,为了形成一个图像。
那个点必须被扫描。
同时记录测试到的强度。这通常依靠两个镜子扫描光束来实现,
叫做共焦激光扫描显微镜方法(confoeal laser seanning mieroseopy,
CLSM)。
测试到的强度被记录并且在一个主机上显示出来,扫描系统也是
靠主机驱动的。获得的所有沿轴向的薄区域很大程度上已经没有了非
聚焦光线,这种效果叫做光学断层,然后,沿Z 轴重复扫描X 一Y 平
面就可以获得可供分析的三维图像。
单个平面在所有Z 区域的投影都会得到一个二维图像,与常规显
微术不同的是,CLSM得到的仅是聚焦区域的信息,因此较大的场深是
通过叠加非常薄的聚焦区域得到的。
要采集到较好的图像,必须结合以下三个因索:激光强度、共聚
焦孔的尺寸和放大器的增益。增加任何一个因素的参数都会使图像更
明亮,但是会损害图像质量。如分辨率降低、信噪比降低或者使图像
漂白。