图像荧光显微镜的原理,适合微生物细胞分析研究
荧光显微镜
荧光显微镜可用来估算微生物群体密度和生存能力,其原理为:某些分子能吸收特定波长的光,并释放出不同波长的光(即荧光),能够在荧光显微镜下被观察到。
自然界有些物质(如叶绿素)能够产生荧光,人工合成的某些物质(如荧光团)也能产生荧光。荧光基团吸收蓝色光形成激发态,激发态电子迅速释放出多余的能量而返回到基态。
当电子释放能量回到基态时,释放出的绿色光能量较低,且波长较蓝色光长。
然而,有些荧光基团能吸收绿色光而激发出能量更低、波长更长的红色光。
在荧光显微技术中,特定的染色剂被细胞直接吸收,或者与细胞中的有机物发生化学反应,或者被特定的亚细胞器富集。免疫化学技术也经常被应用于荧光显微技术,
因为荧光染料可以与活细胞膜中某些部位发生特异反应,所以利用荧光显微镜技术可以区分活细胞与死细胞。“存活但无法培养(VBNC)”的细胞在标准微生物培养基上无法生长,可用荧光显微技术进行观察。
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