分光光度计波长校正实际上就是对仪器进行一些机械调整
波长校正
波长校正实际上就是对仪器进行一些机械调整,来改变光源灯与
单色器的相对位置,使它们能在一条直线上,使波长指示盘是标明
的波长与射入样品比色杯的辐射波长一致,这样才能保证波长读数
与通过样品的波长相符合,才能保证仪器的较大灵敏度,否则分析
结果就会出现明显的变异,在紫外光区波长较短时尤为明显。
有几种化学性质非常稳定的物质可用做标准物质,在特定的波长
范围内校验仪器,例如,镨钕用于可见光区校验仪器,氧化钕用于
紫外光区校验仪器,此外,还有干涉 滤光片及化学性质稳定的化
学试剂及染料等可用以校正仪器。
校正方法
目前使用的分光光度计,在更换光源,重新按装、搬运或检修后
,以及仪器工作不正常时,都要进行波长校正,一般每隔数日就应
检查一次波长,常用的方法有如下几种。
如经上述校正后发现波长读数不在585+1nm范围内,但能看到黄
光,说明波长不正确但偏差较小,可按下列步骤校正。
将波长度舯准确对准585+1nm处,打开仪器外壳,按说明书找到
波长校正螺丝。
如波长585nm,但看不到黄光时,校正手续如下:
将波长度盘准确地对准585nm,打开仪器外壳,找到波长调节螺
丝,在比色杯位置插入白纸条,左右轻轻旋转波长调节螺丝,使调
整仪器输出,使指针为50%T左右,左右轻旋转波长调节螺丝,至透
光度读数较低,当透光度较低时,波长应为585+1nm。
检查波长刻度盘的指示值,与调节到的波长529nm误差情况,例
如指示值为534nm,此时波长误差为534-529=5nm.超出规定,必须
进行调整同,将波长刻度调节到529nm处,将镨钕片由光路拉出,
光路空白时调节100%旋转 使电表指示为100%T,并检查零点,再将
镨钕片推入光路,仪器左侧小盖板,找到波长校正螺丝,反时针微
微调节波长校正螺丝,使电表的透过率指示降至较低,反复检查波
长误差情况,直到符合仪器技术指标要求为止,较后将左侧盖板复
原,校正即结束。
光线校正法
单光束分光光度计用此法校正波长比较简单,常用氢灯、氘灯和
低压汞灯,它们可发射一系列波长为定值的射线,其范围包括可见
光和紫外光区,汞灯可发射不连续光谱如297、302、303、360、57
8nm等光波,做为波长校正使用,氘灯可发射486nm射线,也可用于
波长校正,当波长再变更时,透光度又下降,记录较大透光度时的
波长,然后按已知的汞线数值调正仪器的波长。显微镜光源为仪器
厂出品,高压汞灯,超高压汞灯或其它紫外线灯管,高压汞灯是一
种可见光和长波紫外线辐射很强的光源,含有丰富可作为分光光度
计波长校正之用。