荧光显微镜与普通透射光吸收研究用显微镜的区别
荧光显微镜技术:光学系统
发射光的波长要长于激发光的波长,是荧光显微镜光学系统的基础
这种显微镜与普通透射光吸收研究用的显微镜的区别是有两个滤片。一个初级(激发)
滤片置于光源和标本之间。这个滤片与所用光源组合在一起,提供一个相当波段的光,
这光的波长与被研究的荧光色素的激发波峰相适应。另一个滤片即第二滤片或屏蔽滤
片,它只是为了防止激发波长光进入观察者的眼,置于物镜和眼之间。在所使用的激发
光范围内,其透光度应该尽可能低,而在荧光色素发射光谱区域内,其透光度应尽可能
荧光染色术(fluorochromy)
用于染色的荧光染料称为荧光色素以区别子那些专用予透射
光观察的透光色素(diachrome)。许多染料既可用为透光色素又可用为荧光色素。例
如刚果红、伊红、硷性品红(对玫苯胺)。大多数黄、橙和红色染料实际上具有荧光,就
这些染料而论,荧光显微镜术只是显示染料的另外一种方法,它的应用不会改变染色的
特性。使用强荧光料,由于较低浓度的染料便可被观察到,因而增加了染色反应的灵敏
度。然而一个标本染色很深的区域,由于浓缩熄灭,可以只呈现微弱的荧光,除非使用
落射照明。由于这个原因,通常用于荧光染色的染液,比透光染色要稀得多。一个典型
的荧光色素染液,其浓度是1:10,000,有时使用更稀的溶液。
用荧光显微镜术检查一个染色反应的结果,可有两个特殊的优点5首先扩大了可用
染料的范围,包括那些有荧光,但是在可见区域无色,或只是浅染的染料。这类荧光色
素的代表是硫黄T和BA0。荧光显微镜术第二个优点是,这种方法
较通常的吸收显微镜术,能显示更少两的燃料