荧光技术在显微镜的应用-荧光光谱的的原理
物质受紫外光照射时发出各种颜色和不同强度的可见
光，但当紫外光停止照射，光又随之消失，这种光叫做荧
光。荧光分析法是用荧光分光光度计测出与荧光物质浓度成
线性关系的荧光强度的一种分析方法。
吸收光谱与荧光光谱
让不同波长的紫外光照射荧光物质溶液，测其相应吸光
度，用吸光度对波长绘制的曲线即荧光物质的吸收光谱。荧
光分析中所用的激发光是该物质吸收光谱中某个吸收峰所在
波长的光。当激发光的波长和强度保持不变，转动单色器在
不同波长下测定荧光物质所发出的荧光强度，以荧光强度对
波长作图，则得该物质的荧光光谱。荧光物质的吸收光谱与
荧光光谱存在着“镜象对称”关系
物质发生荧光，主要决定于其结构，其次是要有高的荧
光效率。荧光效率是发出荧光的量子数与吸收激发光的量子
数之比。许多吸光物质并不发生荧光，就是由于它们的荧光
效率低，而将所吸收的能量消耗予与溶剂分子或其他溶质分
子之间的相互碰撞的缘故。
影响荧光强度的因素：
1．同一种荧光物质在不同溶剂中荧光光谱位置和强度要
发生变化。一般荧光峰波长随溶剂介电常数的增大而增大：
荧光强度随溶剂增大而增强。
2．温度对溶液的荧光强度有明显影响。一般温度降低荧
光效率升高，荧光强度增大。因温度降低，介质的粘度逐渐
增大，荧光物质分子与溶剂分子的碰撞也随之减弱的缘故。’
可见低温荧光分析可大大提高灵敏度。
3．有些荧光物质在激发光长时间照射下，容易发生光
解，从而使荧光降低。为此测定时应尽量缩短照射时间。
4．溶液的PH对荧光强度有显著影响。荧光物质往往是
弱有机酸或有机硷，其分子量负离子经常是结构不同的互变
异构体，其中一个常是非荧光物质。
