生物荧光-荧光素酶分析经常用于检测ATP量
生物荧光
生物荧光是激发态时生物分子发出可被测定荧光的过程,这个
过程可被用来测定微生物代谢产物中ATP的量。理论上,测定ATP的
量可以反映活细胞数量,因为活细胞数越多,产生的ATP量越多。
单个酵母细胞产生的ATP量要多于单个细菌细胞产生的量,因此对
酵母的检出限可以低至10个细胞。
荧光素一荧光素酶分析经常用于检测ATP的量,因此荧光素一
荧光素酶生物荧光技术已越来越多地替代传统消毒和平板计数法来
检测无菌程度。现在,又有一些生物荧光检测试剂盒投放市场。只
要购买检测器后,每次测试只需包括样品收集容器、消毒和其他试
剂的费用,价格便宜。虽然该方法已被应用于酒精类和非酒精类饮
料的生产中,但是通过检测ATP的量来推算活细胞的量存在一个很
大的弊端。微生物种类不同以及同种微生物所处的生理状态不同(
如受伤状态、饥饿状态等),ATP的产生量相差很大。而且,该方法
不能分辨由酵母或是别的微生物产生的ATP,使实验结果难以诠释
。比浊法和光密度
一直以来,分光光度计与浊度测定仪被微生物学家用来快速检
测细胞密度和特定化合物浓度(如颜色、苹果酸等)。分光光度计是
检测光通过某种样品溶液后被吸收或是通过的光强度,浊度测定仪
测定的是光的散射程度。
分光光度计接收通过的光(420nm或者650nm)与光源处在同一条
直线上,而浊度测定时需与光源垂直。要事先绘制好吸光值和细胞
密度或其他一些参数的标准曲线,才可以通过测定吸光值推算出未
知样品的细胞密度等。因此一个成功的应用就是需要用其他计数方
法来校正吸光度,较常用的就是直接平板计数法。