恒冷箱切片是光学显微镜酶组织化学常用较佳切片
切片
根据实验需要,切片可用恒冷箱切片、组织切片机切片、振动切片
机切片和刀片手切等。
恒冷箱切片
恒冷箱切片是光镜酶组织化学中常用的较佳切片。新鲜组织或固定
材料在恒定的冷室、恒定的温度下能制成厚薄均匀的、无人工假象的切
片。这种切片可作为电镜酶细胞化学实验的预试验和并行观察。尤其是
定量酶细胞化学,一般用光镜组织化学反应进行定量测定,用电镜酶细
胞化学反应确定酶的定位差异,两者结果互为补充。
冰冻组织时,细胞质和细胞间质的温度从冰点(约-2℃)到再结晶(
-130℃)之间会产生冰晶,冰晶的形成是由于大结晶的水分而产生的。
冰冻时为防止产生冰晶,漂洗后的固定组织可置30%蔗糖液中处理
12—24h,开始时组织块是浮的,较后沉入瓶底即可置恒冷箱切片机冷
冻台上。也可用进口的专用冷冻包埋剂(OCTcompound)处理,效果更好
。在冷冻台的组织置液氮中速冻10min,待组织块温度与冷室温度达到
平衡时切片。
冷冻时常用液氮或其它冷冻剂。固定组织块冷冻后,由于组织块过
度变硬,温度低于一20℃时伤刀,要升高箱内温度至合适温度(表5—6
,5—7)。