用于显微荧光测量的仪器为显微荧光分光光度计的应用
用于显微荧光测量的仪器为显微荧光分光光度计(microspectrofluorimeters)
该仪器主要为用于荧光激发和发射光谱的定量而设计的?也可测量透射和反射光谱。利用落射系统还可同时记录荧光发射和在激发波长的透射。 显微荧光测量时,未知物荧光与标准物荧光相比较才能精确定量。 荧光标准物的必要条件是:①与被测量的荧光体相同,或至少是具有相等或相似荧光激发和发射光谱的荧光体;②具有好的重复性;③足够的稳定性。一个与蛋白结合的荧光色素的荧光特性与未结合的荧光色素并不相同。 所以,一个荧光色素的溶液可能不适合作为已结合荧光色素的标准物。若无标准物,只能对不同实验组进行相对定量比较。 显微荧光测量在荧光标记和免疫荧光标记中应用较多。神经组织中的儿茶酚胺、神经通路的荧光标记、酶、肽、蛋白质的免疫细胞化学等研究中均可采用显微荧光测量方法进行定量测定。近年来应用较多的流式细胞光度计也常采用荧光标记测定方法。
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