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微粒体细胞超微结构层析透射式电子显微镜




来源:yiyi
时间:2016-11-19 23:11:56

微粒体细胞超微结构透射式电子显微镜

常用于细胞特异物质(如抗原)的定位,方法是将细胞与铁蛋白标记
的抗体共同孵育,然后经染色、包埋、超薄切片,在透射电镜下铁
蛋白形成高电子密度颗粒,可以精确地、特异性地显示出相应抗原
的部位、分布。用铁蛋白标记配体,还可研究、显示膜受体。但由
于铁标记较单一,现已不常用。在金属标记中现用得较多的是胶体
金标记。胶体金标记技术是显示细胞中某种特殊物质结构的技术,
胶体金为一种带负电荷的疏水胶体溶液,由吸附的周围离子云维持
胶体的稳定性。胶体金标记有直接法和问接法两种,直接法是金标
记物直接标记细胞结构;间接法是标本先用第一抗体血清处理后,
再用金标蛋白A或金标第二抗血清处理。蛋白A(protein A)是从金
黄色葡萄球菌分离出来的一种蛋白质,具有结合免疫球蛋白的功能
。胶体金标记可用于光镜,也可用于电镜,包括透射式电镜和扫描
电镜。

    细胞离体成分的分析是将细胞破碎,取其某种细胞器或针对某
一化学成分进行分析。例如,破碎细胞通过梯度离心分离线粒体,
在体外可测定ATP的合成及分解功能。细胞中的内质网经分离出细
胞后可形成囊泡,称为微粒体,其中包括各种酶成分,对这些酶成
分的分析有利于对内质网功能的研究。对细胞化学成分的分析方法
很多,如蛋白质分析就有层析法、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳等。层
析法又有多种,常用的有柱层析,方法是使蛋白质混合液通过含有
多孔固体基质的柱,不同的蛋白质与基质相互作用而被不同程度的
滞留,当其从柱底流出时,即可被分别收集。选择不同的基质,就
可根据蛋白质的电荷、分子量大小或特殊化学基团的结合力而分离
出不同生物活性的蛋白质。sDS聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种常用的
方法,SDS为带负电荷的去垢剂,即十二烷基硫酸钠。它可以使蛋
白质展开成为伸展的多肽链,并与其他蛋白质或脂质失去联系。这
样在聚丙烯酰胺凝胶中进行电泳,就可使复杂的蛋白质混合物被分
离成一系列按分子量大小依次排列的区带,很容易进行鉴别分析。

细胞器的分离和提纯是为了更好地研究细胞超微结构的化学组成和
生命活动。细胞器的分离常采用差速离心法,即首先将细胞破碎,
然后在低温和适当pH条件下用不同转速的离心机将细胞的各种成分
分开。如低速(1000r/min)短时间(15min)离心可首先将较大的细
胞核沉淀下来,用高速(8000~25000r/min)离心可使次大的线粒
体分离,再用超速(25000~8500°F/min)离心,可收集溶酶体等
封闭小泡以及核糖体。差速离心不易得到纯净的细胞器和组分,其
中常混有膜和一些颗粒结构。

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