双光子荧光显微镜用于荧光细胞中PH定量图像
双光子荧光显微镜只能用于荧光图像，不能用于明场光透射．分辨
率较标准共聚焦低一半．环境要求较高，室温18—22摄氏度，洁净
实验室1000级(低颗粒含量)，灰尘若多，则易损伤光学镜头．为保
证光学稳定性，应采用抗震浮动光学平台，故设备成本高昂，不易
普及．全内反射荧光显微镜
很多细胞质变化须在细胞的有限范围内观察，如细胞浆膜．全
内反射荧光显微镜提供一种非常接近表面的成像方法．当激发光通
过高反射系数的玻璃到低反射系数的细胞，仅观察到超过一定反射
角度的反射光。
进入低反射系数细胞的激发光迅速衰减，激发光仅深入到距细
胞表面100 nm．因此，仅观察到细胞膜荧光图像．采用TIRFM已获
得单个活细胞中细胞膜上单分子图像
用荧光染料Cy3标记人表皮细胞(A431)的表皮生长因子(EGF)，
EGF是小肽激素，可诱导细胞增殖．
荧光寿命图像显微镜
荧光寿命图像显微镜(FLIM)已用于活细胞中pH定量图像c42)，
应用于活细胞中酶活性成像．也可以检测活细胞中多种荧光染料如
绿色荧光蛋白变异体．FLIM分辨率有限，技术上要求十分严格及复
杂的数学处理，对其前景并不看好．
