酶在生物代谢中的作用及酶分子构象的变化
酶动力学
酶提纯后,首先要用动力学的方法来研究酶促反应的速度以及
影响此速度的各种因素。用以进——步探讨酶的结构与功能的关系
,酶促反应的机理,酶在生物代谢中的作用,和酶如何调控药物的
生理作用等。酶动力学的数据
酶促反应的速度系以特定时间内产物生成量或底物减少量来计
算。方法很多,视酶、产物和底物的性质而定。一般要在酶促反应
开始后间隔适当时间从反应溶液中取样少许,将酶的活性破坏,使
反应停止。然后再用沉淀法,比色法、吸收光谱法、或放射性同位
素法来测定产物的生成量或底物的减少量。其中以吸收光谱法较为
方便,因方假若产物或底物本身在紫外或可见光谱区即有较大的吸
收值时,即不必再将产物或底物从反应溶液中分离出来,就可以测
出它们变更的量,并且可以连续地绘出吸收曲线。有时反应物本身
的吸收光谱不显著,尚可以设法利用一个并行相辅的反应。在这个
反应中光谱吸收的变化大,于是间接便测出原来反应的速度,得到
各种酶动力学的数据。
酶分子的失活和复活都伴随有构象的变化。但由实验上的验证
,失活的速度大大地快过构象变化的速度,而复活的速度却慢过构
象恢复的速度。很可能是若使用变性剂使酶失活时,在酶分子一分
解为亚基时,就已失去了活性。也可能是在活性部位中参与催化反
应的各个基团间的完整空间关系一旦发生变化,就可以引起酶活性
的丧失。但是我们还要认清,不是每个酶分子在失活时,其构象变
化的情形和速度都是一佯的。也不是三维的构象展开多少,酶活性
即失去多少。因为酶的失活和每个个别分子的环境及遭遇都有关,
不是每个酶分子都会和变性剂分子即时遭遇的。