用来测定分子量-蛋白质的近似分子量技术测定
大小和形状的测定
详细讨论用物理技术来测定酶分子的大小和形状，
找出蛋白质的近似分子量较常用的方法之一就是凝胶过滤法。将欲
测的蛋白质溶液通过一个装有用交联多聚体制成的小珠状体的柱。小分
子(如氨基酸)能够穿透珠状体的细孔，较大的蛋白质分子则不能穿透并
直接通过柱，也就是说都被珠状体所斥。一些中等大小的分子比氨基酸
较难穿透凝胶珠状体，从而也部分地被排斥掉了
这种技术的详细理论是极其复杂的。不过实际用来测定分子量却是
非常简单的。将少量含有已知分子量的或未知分子量的蛋白质浓溶液，
从凝胶珠状体柱的顶部加入，凝胶珠状体事先在适当的缓冲溶液中泡胀
，并放入柱内使形成一均匀的柱。用缓冲液从柱的顶部冲洗样品，把通
过柱流出的液体收集在一个部分收集器中，分段收集器保持每部分的流
出液容积尽可能地小。洗脱一种特殊蛋白质所用缓冲液的容积可用分析
该蛋白质的各流出部分来测定。将已知分子量的蛋白质洗脱容积，与未
知分子量的蛋白质的洗脱容积加以比较，就可以估计出它的分子量，其
精确度约为5％。实际上，当用这种技术测定时，发现某些蛋白质具有
一种不规则的分子量。这些蛋白质一般是呈纤维状或雪茄状，所以，测
得的分子量不能给出一种真正的大小的指征。理论上讲，凝胶过滤法是
假设蛋白质是呈球形的，为了进入凝胶珠状体网络时不需要一种特异的
排列。显然这种设想对于纤维状分子来说是行不通的，因此测得的分子
量是变化不定的。
