细胞悬液培养可分为两类:单层细胞培养和悬浮培养
细胞计数的方法:首先用0.1克分子量的枸橼酸溶液,使细胞核
与细胞质分离,然后再用O.1%结晶紫溶液,使细胞核染色,将已
染色的细胞用生理盐水作定量稀释,并注入细胞计数器进行计数。
也可采用不染色直接注入细胞计数器中计数。为了增加计数的准确
性,计数前必须搅动悬液菠细胞分布均匀;在悬液注入计数器时,
不要用力太大,只须从吸管中轻轻地挤出一滴悬液,依靠毛潮管的
吸力,使悬液流入计数器。计数时,在低倍显微镜下数出四焦姻天
诲中的细胞数,仅计算有胞浆和胞核的完整细胞数,根据以下方程
式,算出每毫升悬液中的细胞数
如果稀释细胞的悬液并非l毫升,只须将细胞数/毫升再乘以
悬液毫升数,即得悬液中的细胞总数。
由于染色的细胞核看起来比较清楚,而且可以区别出正常健康
的细胞核和早期坏死阶段的细胞核,为了计数的准确性,还是采用
染色计数的方法为好。(近代电子细胞计数器已逐步代替了细胞计
数器的计数方法)。
悬液培养法
细胞悬液培养法可分为两类:一类是单层细胞培养,或称定量
培养。细胞在这种培养里虽然是用悬液状态接种于培养瓶内,但接
种后细胞立即沉入瓶底,固着干玻璃底面进行增殖。因此,这种培
养实际上还是一种静止状态的培养。另一类是悬浮培养,它是一种
活动状态的培养,即通过一种特殊的装置,使悬液不停地滚动,细
胞在培养液中始终保持悬浮的状态。这种培养法可使细胞大量的繁
殖,获得大量的细胞。今仅介绍单层细胞培养法。
单层细胞培养:单层细胞培养,多用于不同实验条件下细胞的
定量测定和病毒的研究上。
单层细胞培养,其细胞的来源有两种,一种可先通过母培养,
即先经过组织块的培养而获得细胞悬液,再进行单层细胞培养。另
一种来源是利用胰蛋白酶或其他酶的消化作用,直接把新鲜组织的
细胞间质破坏,使细胞分散成游离细胞,再制成细胞悬液进行单层
细胞培养。一般经过母培养的方法比较容易成功,而用组织直接消
化的方法是比较难以成功的。今以免肾为侧,说明单层细施培养的
过程。