光源的波长是影响显微镜分辨率的原因-光学技术
显微镜分辨率
物镜是显微镜较重要的部件,它应形成一个清晰的物像,而不仅
仅是将其放大,而这就与分辨率相关。所谓分辨率就是一个透镜将
两个靠得很近的微小物体分开或辨析的能力。很多在显微镜设计中
得到应用的光学理论都是德国物理学家Ernst Abbe在19世纪70年代
建立的。在Abbe公式中,两物体之间的较小可分辨距离被称为较小
距离;孔径角度是经被观察样品进入透镜的锥形光束角度的1/2,
分辨率越高,也就能观察到样品的更多细节。
光源的波长是影响分辨率的较主要因素。波长必须小于拟观察
两点之间的距离,否则将无法看清。在可见光范围内,蓝光(波长4
50~5~nm)波长较短,所提供的分辨率较高。辐射的电磁波谱
数值孔径值相对不易理解,其中的是进人物镜的
光锥角度的一半。经由聚光器投射到样品上的光束是锥形的,如果
形成的光锥的角度较小,其经过载片后就无法充分伸展并使形成的
物像中紧密靠近的细节分开,分辨率就低。相反,如果光锥的角度
较宽,被观察对象的细节就可以分得更开并被看清。进入透镜的光
锥的角度的大小与物镜自身的特性及其所处的工作介质的折射率(n
)相关。
空气的折射率是1.00,因此以空气为工作介质的透镜的数值孔
径值都不可能超过1.00,
当用浸没油取代空气时,很多原来由于在透镜及载片表面的反
射和折射而损失的光线可以进人物镜,从而使数值孔径值和分辨率
均得到提高。
显微镜的较终分辨率是由物镜和聚光器的数值孔径值共同决定
的,