分离纯化菌种过程中需要转接菌落到液体培养基
菌落的转接和纯化
在分离纯化菌种过程中需要转接菌落到液体培养基中。
1．在菌落转接前，首先用气相色谱仪分析培养管中是否有甲
烷存在。若有甲烷，表明培养管中存在产甲烷菌菌落。鉴于在所有
厌氧菌中只有产甲烷细菌菌落能同时产生甲烷和荧光，所以可以在
双筒解剖镜下观察不同形状的菌落，在荧光显微镜下挑选产生荧光
的菌落。
2．按厌氧操作法常规要求，在装有5mL液体培养基的培养管中
，加入硫化钠(1％)与碳酸氢钠(5％)的混合液、青霉素液和所分离
产甲烷菌生长的相应基质各0．1mL。
3．把欲挑取菌落的厌氧培养管放置于解剖显微镜镜台上，调节双筒
解剖镜，找到欲挑取的菌落。用胶布固定培养管，不让它移动。
4．将两个氮气流的针头在酒精灯火焰上灭菌，分别打开装有
液体培养基的培养管胶塞，在将要拔出时，小心插入氮气流针头，
绝对避免空气进入厌氧培养管。氮气流针头插进长有菌落的厌氧培
养管后，用胶布固定以防止针头脱出和空气乘机窜人。氮气流量应
比其它操作时适当大一些。
5．将约8℃m长的胶管挂于自己颈部，右端接一根内装有少许棉花
的灭菌毛细管，胶管左端衔于口中。右手拿住毛细管，插入打开胶
塞而有氮气流的厌氧培养管中，用口吸去胶管和毛细管中的空气，
从而使胶管和毛细管中充满氮气。
6．在胶管和毛细管中充满氮气后，右手大拇指和食指夹紧胶
管，同时用门牙咬紧在口中的胶管端，迅速取出并插入欲挑取菌落
的培养管中，毛细管细12：I轻轻接触欲挑取的菌落，此时口轻轻
吸气，使菌落吸进毛细管口。然后谨慎移出毛细管，迅速插入含有
培养基的培养管，轻轻呼气，使毛细管口处的菌落物进入培养基。
呼气不能过大，以避免使口中空气吹入液体培养基，破坏培养基厌
氧环境。取出毛细管，塞好胶塞。
7．当以氢和二氧化碳作基质时，则用无氧的氢气代替氮气，
再加入3mL无氧的二氧化碳，或者直接使用氢气和二氧化碳的混合
气体。转种后样品置34～40℃下培养，培养好时，摇动培养物应出
现云雾状或乳白色胶团。与未接入菌落的液体培养基相比，判断是
否有产甲烷菌生长和生长的优劣。
