菌落中有不同株系的真菌-原生质体分离技术
单菌丝和单孢子分离
一般的分离方法不能排除菌落中有不同株系的真菌存在，在进一步
研究真菌的遗传性、变异性、准性生殖等现象及菌株的精确生理指标时
，有必要要求菌种由单孢子或单菌丝繁殖而来。
稀释挑取法用2mL注射器及4号或5号注射针头，将针尖用三角锉锉
平，使滴下的水滴大小不超过80一150倍低倍镜的视野，这样改装的注
射器即为单孢子分离注射器。以无菌的这种注射器吸取制备好的真菌孢
子悬液，使其孢子的浓度在每滴有。一2个孢子的范围内，把悬液滴在
无菌的载玻片上，镜检确系只有1个孢子后，再接种于培养平皿中培养
。也可将悬液滴在水琼脂平皿中，滴下的位置用记号笔标出，然后镜检
，确系是单孢子后，再用切取器将带有小块孢子的琼脂切下，移置到培
养基中培养。切取器可用钢丝、铂丝或镍铬合金丝制成，先将金属丝打
扁，弯成直径2mm的小环，或弯成扁平的钩，以便挑起移植切下的琼脂
小块。
2．单菌丝分离法 在研究中有时需要切割菌丝体，进行单菌丝
分离。单菌丝分离方法是将真菌移植在清洁的水琼脂平板(15—209
琼脂，水1 000ml，高压灭菌)上，培养后在立体显微镜下寻找单根
伸长的菌丝，用磨得尖锐的接种针或接种钩，将菌丝先端连同琼脂
一起切下，移接在培养基上培养。由于水琼脂缺乏营养，菌丝生长
稀疏，易于寻找到单个的菌丝。
3．原生质体分离法 利用细胞壁分解酶裂解菌丝体或芽生孢子
时，原生质体便会从菌丝顶端或待孢子细胞壁被消化后释放出来。多
细胞真菌每个菌丝细胞释放一个原生质体或分裂为若干个。因而通
过原生质体的分离及再生可以获得单细胞株系，或比单细胞还小的
单核原生质体发育而来的株系。用这种方法可以一次获得大量的由
原生质体单元而来的菌株，工作效率很高。
4．显微操作器分离法 显微操作器实质上是一种微调的机械
手，用来代替人手的直接操作，进行细胞分离、解剖、注射、单孢
子分离和茵丝切割等，有关原理和应用操作详见各仪器所附的说明
书或专门文献。
