荧光显微镜压汞灯发出的光经集光器聚光后观察标本
荧光显微镜压汞灯发出的光经集光器聚光后通过激发滤色镜(有时还有副激发滤色镜),只有蓝光、紫光及紫外光得以通过,经分向镜将光反射后进入镜筒,向下通过物镜而照射用荧光染料处理过的标本,激发出蓝色或绿色的荧光沿光轴向上发射,通过分向镜及阻隔滤色镜(有时还有副阻隔滤色镜)及目镜而成像。此刻有害的紫外光已被全部滤去,视野中所见只是暗视场衬托出的光亮而清晰的物像;根据需要也可让镜座上灯室发出的可见光通过而产生亮视野,以显示发出荧光的目标所在的部位特征。由于荧光染料在光照下极易衰减(褪色),故观察及摄影需抓紧时间;除摄影外,不应使用强光,可由滑动进光门调节;另外,荧光显微镜应在暗室内工作,而荧光染料母液(保存在冰箱冷藏室内)及工作液均应裹以铝箔遮光。
不同的荧光染料吸收光谱不同,故应针对不同染料选用透光性能不同的激发滤色镜、分向镜和阻隔滤色镜。
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