荧光显微镜设计的物镜平面校准的特点-光学仪器
生物研究质量级显微镜台,有足够的重量能抗震(可能的情况
下放在一张防震桌
上)
正立或倒立反射荧光显微镜和光学设施包括:
反射照明器(n-1人工控制的中心和场光圈大小;筛选中间密度
的细缝和红外滤
光器)
高倍物镜头(如60×、63×或100×)
激发滤光器,发射滤光器和双色镜
电子控制的遮光器
冷却式CCD相机
计算机,带有数字化图像捕获插件以及控制快门和图像捕获的
软件1.显微镜座台不能随温度热胀冷缩,聚焦系统要求高质量,
并且能够在长期的时延图
像捕获过程中固定焦点以避免人工物象。显微镜应该装备高质量
的反射照明器,包括一个100W HBO的汞弧灯,一个装有反光镜的灯,
能够人工调节灯泡的亮度和Koehler反射照明同轴反射中心。
物镜头应尽可能具有较高的分辨率,例如,配有高数
字化的光圈(1.4NA油镜)
记住60×或者63×的镜头转移光线的效率比100×的镜头较高
。然而,不能因
为这个优点而忽略了系统的清晰度。镜头不应该有形成对比的因
素,例如,能阻断
光子传送的相位环,还应该校准镜头不能产生异彩(高度消色透
镜),并且还应该高
效传送捕获的光波。这些因素决定于荧光物质的选择。关于镜头
光谱效率的信息掌
握在制造商手中。
当捕获一个小标本时,不可能平场校准镜头(平面校准)。确实
,通常专门为外
荧光(Super Fluor-、Nikon;Fluor-或者Fluar-透镜)设计的物
镜不是平面校准的,
因为这种校准给透镜增加了玻璃成分,玻璃成分越多,丢失光子
的地方越多。然而,
在一个平而宽的视场中,作者用DIC一级别平面高度消色物镜取
得了很好的效果。