多重标记实验荧光显微镜采用不同滤光镜组合
荧光显微镜检测的原理是用一定波长(激发波长)的光激发荧光
染料中的电子，使它们跃迁到外层电子层。这些激发的电子很不稳
定，在回到稳定状态的过程中将释放能量，即发射荧光(发射波长)
。激发光通常是用高压汞或氙电弧灯产生，它可以发射出高强度的
所需波长的光。用滤光镜选择合适的激发波长的光后，即可以显示
某一特定的荧光染料。较常用的荧光染料有DAPI(在[1V光激发下发
出蓝色荧光)、FITC和荧光素(蓝光激发下发出绿色荧光)。
在多重标记实验中，可以采用不同的滤光镜组合对同一图像进
行多次曝光，拍下不同荧光染料的图像。如果每个滤光镜组合的排
列是相同的，而且发射滤光镜的表面是完全平行的，那么就不会有
问题，而且可以对每种荧光染料的曝光时间进行优化。但是不同的
滤光镜不能排齐时，问题就来了，因为多次曝光产生的重叠图象会
被抵销。现在可以用两重或三重滤光镜块解决这一问题。分别显示
两或三种荧光染料并同时拍摄下来，如果人们需要对不同探针的相
对位置进行精确判定的话，这一点就非常重要了。
多重标记和再杂交
在检测植物中的低拷贝序列时一般建议不要同时对一个以上的
探针进行检测，因为增加的检测试剂有可能会增加背景信号。但是
，如果背景不成为问题的话，那么由此得到的增加的信息对于植物
染色体定位作图来说将极具价值，因为定位的速度加快了，并且可
以将序列彼此之间进行排序
