涂片制备就是将一环微生物培养物涂在载玻片上
涂片
涂片(Smears)就是将一环微生物培养物涂在载玻片上,可以用
来观察死的微生物。微生物刚放到载玻片时是活的,但经固定步骤
就将其杀死了。制作涂片常是初学者的难点。如果涂片涂得太厚,
就难以观察单个细胞;而如果涂得太薄,就可能会找不到微生物。
如果将那滴培养物涂在载玻片上时搅得太厉害,又会破坏细胞原来
的排布。这样,通常以四联体形式(四个一体)存在的微生物就会被
看成是单个或成对的菌体。这常常会使初学者误以为他们看到了多
种微生物,而事实上,它们都属于同一种微生物。
涂片后应使其完全风干。然后将其快速通过火焰3~4次。这个
过程称为热固定(heat fixation)。热固定主要有三个目的:①杀
死微生物;②使微生物黏附在载玻片上;③使菌体更容易染色。如
果载玻片还没在完全风干,你就将其在火焰上移动,菌体就会煮沸
而被破坏。如果热固定不够,菌体就无法粘在载玻片上,在后续步
骤中易被冲洗掉。任何活细胞都很难着色。如果热固定过度,微生
物将会被烧毁,你会看到被破坏的细胞和细胞残骸。微生物的某些
结构(如荚膜),经过热固定就会被破坏,所以应省略这一步骤,只
需通过风干使之粘附到载玻片上。