细胞裂解之溶质浓度细胞壁检测生物显微镜
渗透裂解
细胞内的溶质浓度和膜压力一般来说是高于外界的,当外界浓
度小于细胞内时,浓度梯度会使水流入细胞,反之亦然。只有水才
能通过膜,如果没有支撑,细胞会因此静水压力引起的渗透震扰肿
胀并破裂。
大多数的微生物都不能直接被渗透震扰作用,除非细胞壁提前
经过酶作用或者在培养时抑制了细胞壁的合成。使用稀释的缓冲液
或蒸馏水快速稀释(10~20倍)可以有效地裂解原生质球和原生质体
,所产生的囊泡的大小取决于稀释的速度和程度。本方法通常将样
品离心后得到原生质体或原生质球,再加入裂解液中进行裂解冻融
法
冻融法可以提高革兰氏阴性细胞对溶菌酶和表面活性剂的敏感
度,可用于对大批量膜或者亚细胞细胞器的分离中。
表面活性剂在细胞裂解中的应用
表面活性剂是一种既有亲水性又有憎水性的两性分子,在革兰
氏阳性菌肽聚糖的完整性或革兰氏阴性菌外层膜被破坏的情况下,
能够提供较温和的裂解方式。表面活性剂在选择性溶解细胞质膜(
脂双层)的同时,可以保持外层膜的完整性,细胞便随之破坏:表
面活性剂还可以用于除去核糖体、多聚核糖体和革兰氏阳性菌细胞
壁中的膜污染:表面活性剂可使蛋白质变性,由于染色体和质粒DN
A对机械方法中产生的流致压力很敏感,因此表面活性剂法也是较
普遍使用的细胞裂解方法之一