生物学物理特征复合物层析检测生物显微镜
亲和层析
原理亲和层析是利用了大分子较独特的特性，即生物学特异性来
纯化一种大分子的。因此，与通透层析和电泳等方法相比，亲和层
析从理论上讲是能产生一个绝对的纯化作用，而通透层析和电泳等
方法是以物理特性为基础的(对于一些有关的大分子来说，这些特
性可能是十分相似的)，所以往往不能得到所需要的纯度。
迄今，这种技术主要是用于蛋白质的纯化，但是从原理上说，
也同样能适用于抗原和抗体;维生素、激素和药物的结合蛋白;药物
“受休，’运载蛋白;多核蛋白体复合物;多酶复合物和阻遏物的
纯化。
以酶作为例子，由于它的立体结构，所以只有很少数的化合物
(配位体)能达到它的活性位置和调节位置，这些化合物可能是底物
或是一种可逆的或不可逆型的效应物。就是对这些位置的特异的识
别，构成了酶亲和层析的基础。倘若，这位置对配位体有很高的亲
和力，结合是可逆的，并且在所选择的实验条件下配位体结合到位
置上后不发生任何反应，那么纯化是可能的。
基本上，这技术是通过一种方式把配位休(通常是一种可逆的
竞争抑制剂)共价地结合到一种适宜的不溶性的基质上，而又不损
伤它与酶的结合能力。然后把一个杂的酶溶液加到浸泡在恰当缓冲
液中的经配位体结合过的基质柱上。酶被选择性地留在柱上，不结
合的杂质被洗脱下来。随后，用一种在不同pH和(或)不同离子强度
的介质中的底物溶液把酶取代下来。
因此，这方法需要预先详细地认识酶的动力学特点，以便可以
小心地设计较佳的实验条件。所选择的实验条件尽可能地与在一个
正常的分离系统中研究酶的条件相一致。
必须认识到在任何一种大分子的纯化中，方法的原理遵循如下
的通式:随着大分子逐渐被加到柱上，由于这过程是可逆的，因而
促使了已停留在柱顶部的，但还没有真正被结合的另外一些大分子
的结合。结果，出现了一个动态的过程，除了在复合物内的结合强
度增加外，复合物的浓度也增加了。由此决定了纯化过程的效力。
由于在加样时柱的效力逐渐增加，因此柱式方法必然要比杯式法更
有效。
