落射荧光显微镜植物细菌细胞进行荧光测定分析
落射荧光显微镜能够对从植物组织回收的大量的细菌细胞进行荧光测定分析,广泛用于对细菌基因表达的频率分布进行分析。
一种在共聚焦激光显微镜下对叶子上细菌GFP荧光进行原位测定的方法。该方法是在叶片表面上进行荧光原位杂交,首先用多聚甲醛固定叶片,然后用低浓度琼脂薄膜覆盖,以避免杂交过程对细菌细胞空间分布的破坏。接着透过琼脂膜用共聚焦显微镜观察标记16SrRNA的 E. herbicola细胞,测定细胞的GFP报道融合蛋白的转录活性通过这种方法可以测定某一特定细菌群落中基因表达的空间分布模式。 荧光蛋白DsRed的发现引起了人们的极大关注,因为在基因表达研究中DsRed有潜力与GFP一起形成转录融合而作为一种细菌的内在标记来应用。尽管有研究报告称在单细胞中GFP和DsRed能够被同时激发,但是在荧光共振能量转移(FRET)成像中DsRed也是一个良好的受体分子(以GFP或CFP为供体)。这些荧光蛋白质之间的相互作用会干扰对荧光信号的定量分析,因此,用DsRed和GFP或其变种进行双重标记的适用性还需要作进一步研究。
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