光学显微镜细胞形态的图像质量定量分析实验
组织切片制作方法
组织切片制作方法与非切片制作方法的较大区别是利用切片机
制作出相应的标本切片。制作的切片包括:石蜡切片、火棉胶切片
、冰冻切片、树脂切片、碳蜡切片、电镜超薄切片等。
切片类型的确定主要是依据标本内支持物的种类,如石蜡切片
,其标本内的支持物为石蜡,石蜡填充于标本内的各个空间。因此
,石蜡切片实际上就是切带有标本材料的石蜡,因为标本与石蜡已
经融为了一个整体。同理,冰冻切片的支持物是冰,电镜超薄切片
的支持物就是环氧树脂。目前,较常用的切片种类是石蜡切片、冰
冻切片、树脂切片、电镜超薄切片。
石蜡切片制作过程总体上可概括为9个步骤:取材、固定、脱水、
透明、浸蜡、包埋、切片、染色、封固。制作过程中的每个环节都
是相互关联的,一个环节出了差错,必将会对后续环节的操作产生
负面影响,并有可能较终导致光镜下组织或细胞形态结构观察的偏
差或失败。
取材是指从人体或实验动物体内取下所需观察的组织材料的过
程。
标本主要来源于临床活体检查、临床手术切除、实验动物模型
以及病理解剖等途径。取材的标本要求均为新鲜组织。离体或机体
死亡大于两小时以上的标本材料,其内部可能会出现不同程度的自
溶,严重者甚至会出现细胞的弥散与溶解现象。因此,标本的取材
是标本样品制备过程的第一步,取材是否科学、是否符合实验要求
,将直接关系到光镜下组织细胞形态的观察质量。
做好标本取材前的各项准备工作是保障取材过程顺利进行的前
提。取材过程中所使用的各种器械(解剖剪、手术刀片等)是否锋利
,固定剂的配制与固定容器的选择是否恰当,以及其他辅助性的取
材用具(卡片纸、软木片等)的准备是否充分等,都会直接影响标本
取材的过程。另外,实验动物处死方法的选用要恰当,避免动物濒
临死亡前的过度挣扎,否则会引起机体内缺氧时间过长而导致组织
或细胞结构的失常。
总之,无论怎样实施标本取材的操作过程,其较终的要求就是
整个取材的过程应迅速、准确。