增菌培养物实验样品镜检高倍光学显微镜
增菌培养物,按以下步骤进行操作。
(1)涂片 取一接种环上述培养物涂布于洁净载玻片上,并在左上
角编号,室温干燥。
(2)加沙门氏菌多价O血清和杆菌肽 上述玻片标本上各滴加沙门
氏菌多价O血清工作稀释液1滴,立即加入1滴杆菌肽溶液
镜检与结果
上述玻片标本,以高倍显微镜观察结果。在检样中如有沙门氏菌
存在,菌形呈纺锤形,其大小比原菌大2~4倍,以横径膨胀更为明显
。菌体呈鲜艳蓝色,有些菌体为两极浓染。菌体壁变薄,有扁平感,
失去很强的折光性。视野中未发现免疫染色特征的菌株者,被检样品
中未发现沙门氏菌。对比沙门氏菌使用免疫染色法处理的标本,具有
免疫染色的特征,非沙门氏菌的对比免疫染色,无此特征。普通染色
液染色的沙门氏菌,具有该染色液染色的特征,菌体刁;膨胀,体壁
与折光性无异常。
荧光抗体法
主要仪器和试剂
(1)显微镜玻片 无自发荧光,厚度0.8~1.2mm,在玻片的一面
刻有号码及8个方格(上下两列,每列:格)。每次使用前,必须用洗涤
剂彻底除尽油污,并擦洗干净,经滴水检查,确实无油污后方可使用
。
(2)荧光显微镜 荧光显微镜由电器和灯室两部分组成,油浸暗视
野集光器系统。国产有超高压汞灯荧光光源装置和高色温溴钨灯荧光
显微光源装置,配有一架普通显微镜即可使用。
荧光抗体试剂必须低温保存(4℃左右),稀释后的试剂,应分成小
批,冰冻贮存。在每批试剂首次使用前,或稀释并存放较长时间后,
应用几个不同抗原的已知沙门氏菌测定试剂的效价,并确定或校正其
工作滴度。染色效价,即能使所染菌株呈4+荧光强度的最大稀释倍数
,低于染色效价一个滴度的试剂稀释倍数,为其工作淌度。