培养制备菌落鉴定细菌分析图像显微镜厂家
鱼类传染性病原菌的分离与鉴定
鱼类传染性病原主要包括病毒、细菌、霉菌三大类。不同类群的病
原菌分离鉴定的具体方法不同。因此要分离鉴定种传染性病原菌,首先
必须判别病原菌的种类,然后根据各类微生物病原体的分离鉴定步骤进
行。本实验主要介绍鱼类细菌性病原菌的分离鉴定过程
病原体材料的采取
进行病原体分离,首先应采到含有病原体较多的材料但究竞应采取
何种样品,则要根据鱼类发生的症状、病变区和流行传染状况来确定。
通常以鱼的血液与病变组织为样
血液
一般应选择发病早期的血液为样品。因晚期可能出现血清抗体而抑
制病原体的繁殖或破坏病原体的生存。取血样,通常剖开鱼的心脏,抽
取血液
病变组织以虑病症状明显的活鱼或病死后不久的鱼为对象,用无菌
手术法采下一小块病变组织,迅速放入密闭的无菌容器。
培养甚的制备
材料处理与接种分离采到的材料如是血液,即可用适宜的平板培养
基直接划线接种,分离培养成纯培养物。如果是病变组织,则先用无菌
操作将样品捣碎,加无菌生理盐水制成液浆,然后进行划线分离培养。
若材料中所含的病原体很少,应先接种到适宜的增殖培养,中进行增菌
。同时留1支无接种的对照管,一起放在22C下培养至与对照管有明显混
浊差别时为止,挑取混浊增菌液在平板培养基涂抹或划线分离,冉培养
于22°C直至长出明显的菌落。最后挑取可疑的单菌落分别接种于斜面
培养基,在适温下培养至有显著的菌替长出后,冷藏供鉴定
病原体的鉴定
血清学凝集反应
血清凝集反应试验是鉴定病原体的重要方法之一,具体操作见第九
章。鱼类病原体的鉴定一般采用玻片凝集法与试管沉淀法。
玻片凝集法在无萦载玻片一端加1滴稀释至1:5的已知抗体免疫血清
,以无菌手术法取1滴待鉴定的病原体菌悬液加入血清中混合调匀。同
时在载玻片另端以无菌鱼生理盐水代替血清,加入同一待定的菌悬液1
滴,调匀作对照。2分钟后,对比结果,加入血清后有凝集现象者为阳性,
反之,无凝集现象者为阴性。
试管沉淀法
在12×100毫米的试管中,分别加入稀释成不同浓度的已知抗体免疫
血清,成一浓度梯度系列。然后加入同一浓度的,定量的待鉴定病原体
菌悬液,放入25°C水溶箱经24小时后观察有无沉淀反应,从沉淀产生与
血清的稀释度可知相应的凝集效价。
致病感染反应试验选血清反应呈阳性的菌株,进行健康鱼体致病感
染试验,若能使同种健康鱼感染后出现与自然状况下病鱼相同的病症者
,方可确认为某种疾病的病原菌感染方法可以根据疾病的可能感染途径
采用不同的方法
