细菌悬浮稀释液培养基微观分析显微镜
夹层法
①取经诱变处理洗涤过的细菌悬浮稀释液0,1毫升(约含100个菌细胞)
加到预先制好的基本培养基平板上,再加熔化的琼脂(2%)培养基,迅速
摇动,使细胞分散均匀
②置于适温下培养到长出明显的菌落(淡水细菌1-2天就长出菌落,海
洋细菌要3-5天或更长时间)
③用墨水在培养皿的底部作长出菌落的标位。
④加上熔化的,冷至45°C左右的完全培养基约20毫升,待冷凝后,放于
适温下培养
⑤再经培养后新长出的菌落多数是营养缺陷型
⑥用接种针挑取新长出的菌落,分别点种于基本培养基上并作完全培
养基斜面接种。如果经适温培养后在基本培养基上不生长的那些菌落,
则可初步定为营养缺陷型。其相应的斜面接种物可供进一步鉴定。
逐个检出法将经浓缩的营养缺陷型菌液稀释接种于完全培养基上,在
适温下培养。待长出菌落,逐个挑取菌落,分别接种于基本培养基和完
全培养基上。凡是在基本培养基上不长而在完全培养基上长出的菌落
就可能是营养缺陷型,可供进一步鉴定
限制培养基法
此法也称限量补给法。其方法如下
①在基本培养基中加入5%的营养培养基或加0,01%蛋白胨
②将经浓缩处理的菌悬液涂布接种于上述培养基中
⑧适温下培养,菌落长得较快,较大的为野生型,长得较小、较慢的菌
落可能是营养缺陷型,留待进一步鉴定如果只需要某种缺陷型,可在基
本培养基中加入微量的单一的某种氨基酸或碱基等。其补充量的确定
可先用已有的缺陷型测定。
营养缺陷型的鉴定
其鉴定方法可分为以下两步:第一步先在同一培养皿上测定许多缺陷
型对同一类型化合物的需要,具体方法如下:
①挑营养缺陷型的新鲜培养物点种在营养琼脂平板上。
